ISO/DIS 9308-2

ISO 9308-2:2012 specifies a method for the enumeration of E. coli and coliform bacteria in water. The method is based on the growth of target organisms in a liquid medium and calculation of the "Most Probable Number" (MPN) of organisms by reference to MPN tables. This method can be applied to all types of water, including those containing an appreciable amount of suspended matter and high background counts of heterotrophic bacteria. However it must not be used for the enumeration of coliform bacteria in marine water. When using for the enumeration of E. coli in marine waters, a 1→10 dilution in sterile water is typically required, although the method has been shown to work well with some marine waters that have a lower than normal concentration of salts. In the absence of data to support the use of the method without dilution, a 1→10 dilution is used.

This method relies upon the detection of E. coli based upon expression of the enzyme b‑D‑glucuronidase and consequently does not detect many of the enterohaemorhagic strains of E. coli, which do not typically express this enzyme. Additionally, there are a small number of other E. coli strains that do not express b‑D‑glucuronidase.

The choice of tests used in the detection and confirmation of the coliform group of bacteria, including E. coli, can be regarded as part of a continuous sequence. The extent of confirmation with a particular sample depends partly on the nature of the water and partly on the reasons for the examination. The test described in ISO 9308-2:2012 provides a confirmed result with no requirement for further confirmation of positive wells.

L'ISO 9308-2:2012 spécifie une méthode de dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes dans l'eau. La méthode est basée sur la croissance d'organismes cibles dans un milieu liquide et sur le calcul du «nombre le plus probable» d'organismes en fonction de tables NPP. Cette méthode peut être appliquée à tous les types d'eau, y compris ceux contenant une quantité appréciable de matière en suspension et des nombres importants de bactéries hétérotrophes. Cependant, elle ne doit pas être utilisée pour dénombrer les bactéries coliformes dans l'eau de mer. Lorsqu'elle est utilisée pour dénombrer Escherichia coli dans l'eau de mer, une dilution 1→10 dans de l'eau stérile est généralement requise, bien que la méthode ait démontré son efficacité avec certaines eaux de mer ayant une concentration en sel inférieure à la normale. En l'absence de données étayant l'utilisation de la méthode sans dilution, une dilution 1→10 est utilisée.

Cette méthode repose sur la détection des Escherichia coli en fonction de l'expression de l'enzyme β-D-glucuronidase et, par conséquent, ne permet pas de détecter les souches entérohémorragiques des Escherichia coli, qui n'expriment généralement pas cette enzyme. De plus, il existe un petit nombre d'autres souches d'Escherichia coli qui n'expriment pas la β-D-glucuronidase.

Le choix des essais utilisés lors de la détection et de la confirmation du groupe de bactéries coliformes, notamment Escherichia coli, peut être considéré comme faisant partie intégrante d'une séquence continue. Le niveau de confirmation avec un échantillon particulier dépend d'une part de la nature de l'eau et d'autre part des raisons de l'examen. L'essai décrit dans l'ISO 9308-2:2012 fournit un résultat confirmé sans avoir besoin de confirmer les puits positifs.